Embora sedimentos no meio de cultura possam deixar o laboratório em pânico pelo risco de contaminação, estes podem apenas indicar reação de precipitação normais. Neste caso o meio pode ser usado normalmente após ressuspensão com pipeta serológica.
Figura 1. DMEM normal.
Figura 2. DMEM com precipitados brancos (glutamina).
Para descartar a hipótese de contaminação, deve observar-se o meio de cultura ao microscópio afim de identificar microorganismos, e observar a cor do meio e dos próprios sedimentos. As bactérias alteram o pH do meio e consequentemente a cor do mesmo. Um meio mais amarelado pode indicar que o pH diminui levando a acidez, enquanto um meio demasiado rosado ou arroxeado sugere um pH mais elevado ou alcalinizado.
Se a cor do meio for normal e os únicos precipitados forem brancos, e acima de tudo se o meio for DMEM, mesmo que não seja aditivado com FBS, estaremos na presença de precipitados de sais, de proteínas ou de L-glutamina. A glutamina é um aminoácido essencial com que suplementamos o DMEM, e é extremamente instável em solução aquosa, especialmente se o meio estiver armazenado há algum tempo.
Uma outra hipótese, quando o meio está suplementado com FBS, é estarmos na presença de precipitados de fibrina. A fibrina é uma proteína insolúvel que resulta da conversão do fibrinogénio na presença da enzima trombina. Este fenómeno é mais raro.
Referências:
Gandhi JK, Knudsen T, Hill M, Roy B, Bachman L, Pfannkoch-Andrews C, Schmidt KN, Metko MM, Ackerman MJ, Resch Z, Pulido JS, Marmorstein AD. Human Fibrinogen for Maintenance and Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells in Two Dimensions and Three Dimensions. Stem Cells Transl Med. 2019 Jun;8(6):512-521. doi: 10.1002/sctm.18-0189. Epub 2019 Feb 15. PMID: 30768863; PMCID: PMC6525556.
Jagušić M, Forčić D, Brgles M, Kutle L, Šantak M, Jergović M, Kotarski L, Bendelja K, Halassy B. Stability of Minimum Essential Medium functionality despite L-glutamine decomposition. Cytotechnology. 2016 Aug;68(4):1171-83. doi: 10.1007/s10616-015-9875-8. Epub 2015 Apr 24. PMID: 25904557; PMCID: PMC4960165.